Tách và nuôi cấy vi sinh vật

一、 tách và trồng trọt

Vi sinh vật tồn tại ở trạng thái hỗn hợp trong tự nhiên. Để có được các chủng mong muốn, chúng phải được tách ra khỏi chúng. Nếu nó bị ô nhiễm vô tình khi nó được bảo quản, nó phải được tinh chế. Có nhiều phương pháp để tách và thanh lọc vi sinh vật, Nhưng nguyên tắc cơ bản là tương tự nhau. Đó là, mẫu được tách ra được pha loãng ở một mức độ nhất định và các tế bào (hoặc bào tử) của vi sinh vật được giữ ở trạng thái phân tán càng nhiều càng tốt, và sau đó chúng được phát triển thành đàn đơn thuần. Tuy nhiên, công việc trên không thể tách rời khỏi quá trình tiêm chủng, đó là chuyển vi sinh vật sang môi trường khử trùng khác.

Vật liệu và công cụ phân loại cấy vi sinh:

Lồng ấp nhiệt độ không đổi, Vòng tiêm chủng, que thủy tinh, Pipet, đèn cồn, môi trường nuôi cấy, E. Coli, bacillus subtilis, Staphylococcus aureus, men, v. v.

Phương pháp tiêm chủng hoạt động:

1. tiêm chích nghiêng (nối Staphylococcus aureus)

Trước khi thao tác, hãy lau tay bằng cồn 75% và đốt đèn cồn sau khi rượu bay hơi. Giữ Ống căng và bề mặt nghiêng giữa ngón tay cái bên trái và bốn ngón tay kia, sao cho bề mặt nghiêng và mặt bên với lực căng hướng lên trên và ở vị trí nằm ngang. Đầu tiên, xoay căng thẳng và tampon của dốc để dễ dàng kéo ra khi tiêm. Giữ vòng tiêm trong tay trái của bạn (như cầm bút), khử trùng đầu vòng trên ngọn lửa trước, sau đó khử trùng bằng cách kéo dài vào phần còn lại của ống nghiệm. Sử dụng ngón đeo nhẫn, ngón tay hồng hào và lòng bàn tay phải của bạn để kéo ống mầm ra và nút bông hoặc nắp ống nghiệm của ống nghiệm nghiêng cùng một lúc, và sau đó từ từ khử trùng miệng ống nghiệm (không đốt quá nóng). Mở rộng vòng tiêm chủng bị đốt cháy vào ống hạt giống, tiếp xúc với vòng tiêm chủng trên thành trong của ống nghiệm hoặc môi trường không có rêu, để nguội đủ, sau đó nhẹ nhàng cạo một chút rêu và sau đó kéo nó ra khỏi vòng tiêm chủng ống. Nhanh chóng mở rộng vòng tiêm chủng với vi khuẩn vào ống nghiệm khác để nối. Tạo hình chữ "Z" từ đáy dốc lên xuống dày đặc. Đôi khi cũng có thể sử dụng kim tiêm để kéo một đường ở giữa môi trường để tiêm xiên, để quan sát các đặc tính tăng trưởng của vi khuẩn. Sau khi tiêm chủng xong, Vòng tiêm chủng được rút ra và cắm bông. Khử trùng Vòng tiêm chủng. Đặt vòng tiêm xuống và thắt chặt nút bông.

2. tiêm chất lỏng

Kết nối môi trường nghiêng với môi trường lỏng. Phương pháp này được sử dụng để quan sát các đặc tính tăng trưởng của vi khuẩn và đo phản ứng sinh hóa. Phương pháp vận hành giống như trước đây, nhưng miệng ống nghiệm nghiêng lên trên, để ngăn chất lỏng nuôi cấy chảy ra và kết nối vi khuẩn, cấy vào chà Vòng và thành trong của ống một vài lần để rửa vi khuẩn trên vòng. Sau khi tiêm, một nút bông được chèn vào, và ống nghiệm được Gõ nhẹ vào lòng bàn tay để phân tán hoàn toàn vi khuẩn. Cấy môi trường lỏng từ môi trường lỏng. Khi căng thẳng là chất lỏng, sử dụng Pipet vô trùng hoặc ống nhỏ giọt ngoài Vòng tiêm chủng. Khi tiêm, chỉ cần rút phích cắm bông bên cạnh ngọn lửa, đưa miệng ống qua ngọn lửa, sử dụng Pipet vô trùng để hút dung dịch vi khuẩn vào dung dịch nuôi cấy, và lắc đều.

3. tiêm chủng

Ghi điểm và phát tán vi khuẩn trên đĩa. Cấy chéo xem phương pháp chéo riêng biệt. Lây lan và tiêm chủng tiêm dung dịch vi khuẩn vào đĩa bằng Pipet vô trùng, và phủ đều bề mặt của tấm bằng một thanh thủy tinh tiệt trùng.

4. tiêm phòng

Cấy vi khuẩn vào môi trường nuôi cấy sâu rắn. Phương pháp này được sử dụng để tiêm vi khuẩn kỵ khí hoặc quan sát hiệu suất sinh lý khi xác định vi khuẩn. Phương pháp vận hành giống như trên, nhưng kim tiêm được sử dụng phải thẳng. Đâm kim tiêm từ trung tâm của môi trường nuôi cấy cho đến khi nó gần đáy ống, nhưng không xâm nhập, sau đó từ từ kéo ra khỏi đường đâm ban đầu.

、 Phương pháp vận hành tách:

1. Phương pháp tách pha loãng

Phân Tán Mẫu đã tách ra đến mức tối thiểu bằng cách pha loãng liên tục, sau đó rút một lượng nhất định vào tấm và trộn nó với môi trường thạch thích hợp để nấu chảy, để vi khuẩn phân tán được cố định tại chỗ để tạo thành một khuẩn lạc duy nhất. Escherichia Coli hoặc men được điều chế bằng nước Vô trùng dưới dạng huyền phù vi khuẩn. Lấy vài Ống nghiệm vô trùng, mỗi ống chứa 9ml nước vô trùng. Pipet 1ml huyền phù vi khuẩn đã chuẩn bị và đặt nó vào ống nghiệm đầu tiên chứa 9ml nước vô trùng, để nó được pha loãng 10 lần, tức là 10-2. Rút 1ml từ ống nghiệm đầu tiên (10-2) và tiêm vào ống nghiệm thứ hai có chứa nước vô trùng, để nó được pha loãng 100 lần, tức là 10-2. Hoạt động theo cách tương tự cho đến khi nó được pha loãng đến 10-5-10-6. Rút chính xác 0.2ml dung dịch vi khuẩn của mỗi lần pha loãng ở 10-5-10-6 và thêm nó vào đĩa vô trùng rỗng được đánh số. Lặp lại độ pha loãng tương tự để làm ba món ăn. Đổ môi trường thạch đã tan chảy và làm lạnh đến 45 vào mỗi tấm nói trên, xoay nhẹ nhàng để trộn môi trường và huyền phù vi khuẩn kỹ lưỡng, sau khi đông đặc, đặt nó trong lồng ấp 37 hoặc 38 độ và ủ trong 24-48 giờ, quan sát sự phát triển và phân bố của các khuẩn lạc trên đĩa.

2. Phương pháp tách Scribe giường phẳng

Phương pháp tách vệt tấm là phương pháp tách vi sinh vật bằng cách chia Vòng cấy trên bề mặt môi trường tấm bằng cách phân vùng. Nguyên Tắc là pha loãng mẫu vi sinh vật "từ điểm này sang điểm khác" trên bề mặt môi trường rắn nhiều lần để đạt được mục đích tách. Đổ đĩa hòa tan môi trường Peptone Agar chiết xuất thịt bò, đổ đĩa, và để nó đứng theo chiều ngang cho đến khi nó đặt. Đốt Vòng tiêm chủng trên Ngọn lửa của đèn cồn và chờ nguội, lấy một chất lỏng tiêm chủng hỗn hợp của Staphylococcus aureus và Escherichia Coli. Giữ tấm thạch ở tay trái và nâng nhẹ nắp, trong khi tiếp cận ngọn lửa. Giữ vòng tiêm ở bên phải và kéo dài vào đĩa. Tạo một đường ghi chép trong một khu vực trên tấm. Vòng tiêm chủng cách bề mặt tấm 30-40 °. Nhẹ nhàng chạm vào góc, và sử dụng lực cổ tay của bạn để trượt nhẹ trên bề mặt. Không làm trầy xước hoặc nhúng bề mặt của máy tính bảng vào đế. Đốt cốc tiêm để tiêu diệt chất lỏng vi khuẩn còn lại trên vòng tiêm. Sau khi làm mát, mở rộng vòng tiêm vào đĩa. Sau khi tiếp xúc một chút với đường chéo ở khu vực đầu tiên, xoay 90 °. Hai khu vực tiếp tục được vượt qua. Sau khi đánh dấu, tiêm cốc tiêm, sau khi làm mát, sử dụng phương pháp tương tự để vẽ các đường ở các khu vực khác. Sau khi tất cả các dòng được đánh dấu, sử dụng một bút chì màu đặc biệt ở dưới cùng của món ăn để chỉ ra sự căng thẳng, ngày tháng, nhóm và tên. Đặt toàn bộ đĩa petri lộn ngược và đặt nó trong lồng ấp nhiệt độ không đổi. 37 sau 24-48 giờ canh tác, lấy ra và quan sát. Chú ý đến các đặc tính của công tắc, kích thước, màu sắc, cạnh, cấu trúc bề mặt, độ trong suốt, v. v.

Biện pháp phòng ngừa:

1. Phòng tiêm phải được giữ sạch sẽ, chà mặt bàn và tường bằng chất lỏng xà phòng phenol nghiền thành bột và khử trùng thường xuyên bằng axit lactic hoặc formaldehyd. Trước mỗi lần sử dụng, cần khử trùng bằng đèn UV. Thường xuyên kiểm tra tính vô trùng của phòng tiêm chủng. Trước khi vào phòng tiêm chủng, nên vệ sinh cá nhân trước, và nên thay giày, mũ, quần áo làm việc và khẩu trang trong phòng đệm. Quần áo làm việc, giày làm việc và khẩu trang chỉ được phép sử dụng trong phòng tiêm chủng. Nó không được phép đi đến những nơi khác, và nó nên được thay thế và khử trùng thường xuyên. Các ống nghiệm tiêm chủng, hình tam giác và chai phải được đánh dấu bằng tên và ngày của môi trường nuôi cấy và biến dạng. Tất cả các vật dụng được chuyển vào phòng tiêm chủng phải được lau sạch bằng cồn 70% trong phòng đệm. Trước khi tiêm, khử trùng cả hai tay bằng cồn 70% hoặc xinjieer, không để Ngọn lửa của đèn cồn trong quá trình hoạt động; Băng vệ sinh không được đặt ngẫu nhiên; các dụng cụ tiêm chủng cần được khử trùng bằng ngọn lửa trước và sau khi sử dụng.

2. lồng ấp cần được làm sạch và khử trùng thường xuyên.